免疫組織化學(xué)(Immunocytochemistry, IHC) 是一門利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色的技術(shù),能夠?qū)M織細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定位、定性及相對定量檢測,進(jìn)而深入探究其功能。
切片制作
③固定時間在4~24 h之間,長時間固定會影響抗原決定簇的暴露,且容易出現(xiàn)自發(fā)熒光及非特異性染色。
④抗原修復(fù)時,高壓時間過長,應(yīng)適當(dāng)縮短時間。
⑤烘干溫度為50℃,時間為12~24 h。
④脫蠟不全,可更換脫蠟劑或延長脫蠟時間。
②切片上滴加的試劑未覆蓋均勻或未覆蓋到全部組織,邊緣的試劑少,容易變干,導(dǎo)致邊緣的試劑濃度比中心區(qū)域的高,而使得染色結(jié)果偏深。滴加試劑時要均勻且充分覆蓋到全部組織,為防止邊緣水分減少,滴加試劑時可以適當(dāng)超出組織邊緣2 mm左右,保證組織部分覆蓋均勻。用組化筆畫圈時,距組織邊緣3-4 mm為宜,避免油劑對實驗結(jié)果的影響。
⑥抗原擴散,嘗試使用交聯(lián)固定劑而不是有機(醇類)固定劑。
解決方法:①不當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r溫度過高,影響待測抗原的數(shù)量和質(zhì)量,應(yīng)根據(jù)組織選擇更適宜的固定方式及溫度。
抗原修復(fù)
③避免切片在緩沖液或修復(fù)液中浸泡時間過長(大于 24 h)。
解決方法:①不適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)方式,導(dǎo)致抗原決定簇暴露不足,需摸索修復(fù)條件,改變抗原修復(fù)方法。
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